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Mag-Beads GST融合蛋白纯化磁珠具有高效、快速、方便等特点，针对纯化GST标签融合蛋白而研制的一种新型纯化材料，可通过特有的磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。使用Mag-Beads GST融合蛋白纯化磁珠进行GST Pull-down实验，操作简单、快捷，是传统方法无法比拟的。

• 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；
  
• 在使用本制品前，请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态；
  
• 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬；
  
• 用户可根据实际需要保留经磁性分离移去的上清液，进行取样检测，以便分析纯化过程和优化蛋白纯化流程；
  
• 本制品可以重复使用，重复使用时，建议纯化同种蛋白，纯化不同种类的蛋白时，建议使用新的磁珠，以防交叉污染；
  
• 本制品需与磁性分离器配套使用；
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

• 结合/洗杂液：140mM NaCl,2.7mM KCl,10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4,pH7.4。
  
• 洗脱液：50mM Tris-HCl，10mM还原型谷胱甘肽，pH8.0。

• 谷胱甘肽现用现配。
  
• 不同的GST融合蛋白与磁珠结合的强弱程度不同，对大部分的GST融合蛋白，使用含有10mM还原性谷胱甘肽的洗脱液即可洗脱目标蛋白；对少数结合能力较强的GST融合蛋白，可以适当延长洗脱时间，增加洗脱次数，或提高洗脱液中还原型谷胱甘肽的浓度；
  
• 结合/洗杂液和洗脱液S中可以添加1～5mM EDTA、1～10mM DTT、0.1～1.0% Triton X-100、0.1～1.0% Tween 20等。

• 磁珠准备：将GST纯化磁珠充分混匀，使用移液器取10mL的磁珠悬浮液(磁珠体积为1mL)置于离心管中，将离心管置于磁分离器上，大约1min待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液，加入去离子水反复清洗，去除酒精。
  
• 磁珠平衡：加入与悬浮液等体积的结合/洗杂液，使用枪头反复吹打5次，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液，重复洗涤2次。
  
• 磁珠与蛋白结合：将GST融合蛋白裂解液加入到处理好的磁珠中，颠倒混匀，室温孵育30min(如果目标蛋白不稳定，建议置于2～8℃下孵育1h)。
  
• 磁珠洗杂：将离心管置于磁分离器，待溶液变澄清后，用移液器移出上清液，保留流穿液，以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的结合/洗杂液，使用枪头反复吹打5次，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸取上清液，保留洗杂液，以备取样检测。重复洗杂步骤2次。
  
• 洗脱：加入与悬浮液等体积的洗脱液，用移液器吹打5次，室温下孵育5～10min，置于磁分离器上，待溶液变澄清后，吸取上清液，即为目的蛋白组分。重复上述步骤多次，分别收集洗脱组分并留样检测，以提高目的蛋白的回收量。
  
• SDS-PAGE检测：将纯化所得样品用SDS-PAGE检测，收集含有目的蛋白的组分。
  
• 磁珠清洗和保存：磁珠使用后经过简单清洗处理后，可以继续用于后续的纯化操作，也可以长时间保存。用户可根据磁珠使用的情况选择不同的清洗方法，主要有以下几种情况：
  
  • 情况1：重复使用次数较少，结合能力下降不明显时，可以采用高pH和低pHBuffer交替洗涤的方式进行清洗：
    
    • 高pH洗(碱洗)：使用后的磁珠加入10mL清洗液A(0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl，pH8.5)，漩涡振荡60 s，磁性分离，去除上清液；
      
    • 低pH洗(酸洗)：加入10mL清洗液B(0.1M醋酸钠，0.5M NaCl，pH4.5)，漩涡振荡60 s，磁性分离，去除上清液；
      
    • 重复碱洗、酸洗交替清洗2次，共3次。
  • 情况2：重复使用次数较多时，由于沉淀、变性或非特异性吸附蛋白积累，导致磁珠结合目标蛋白的能力明显下降。
    去除沉淀或变性蛋白，可按下面的方法进行洗涤：
    
    • 先用5mL 6M盐酸胍洗涤2次，每次漩涡振荡60 s，磁性分离，去除上清液；
      
    • 再用10mL 1X PBS洗涤3次，每次漩涡振荡60 s，磁性分离，去除上清液。
  • 情况3：去除疏水性结合物质，可按下面的方法进行洗涤：
    
    • 先用5mL 70%乙醇或浓度为0.1%的非离子型表面活性剂洗涤3次，每次漩涡振荡60 s，磁性分离，去除上清液；
      
    • 再用10mL 1X PBS洗涤3次，每次漩涡振荡60 s，磁性分离，去除上清液。
    
    注意：完成情况1或情况2的清洗操作后，如果用户需要继续使用磁珠用于蛋白纯化，需先用结合/洗杂液洗涤2～3次。如果不需要继续使用，则用20%乙醇洗涤磁珠2～3次后，再加入20%(v/v)乙醇到磁珠中使总体积为10mL，保存于2～8℃。

• 结合/洗杂Buffer：140mM NaCl,2.7mM KCl,10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4,pH7.4。
  
• 洗脱Buffer：50mM Tris-HCl,10mM还原型谷胱甘肽，pH8.0。

• 磁珠准备：
  取适量的GST纯化磁珠(磁珠体积为总体积的10%)，将磁珠反复颠倒，充分混匀，使用移液器取适量的磁珠悬浮液，置于离心管中，将离心管置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液。
  
• 磁珠平衡：
  再将离心管磁分离器上取下来，加入与悬浮液等体积的结合液，使用枪头反复吹打5～10次，将离心管置于磁分离器上大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液，重复洗涤2次。
  
• 磁珠结合靶蛋白：
  将含有GST标签的靶蛋白样品加入到处理好的磁珠中，颠倒混匀。将离心管置于混合仪上，室温孵育30min。
  
• 磁珠洗杂：
  将离心管置于磁分离器，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器移出上清液，保留以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的洗杂液，使用枪头反复吹打5～10次，将离心管置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液，重复上述步骤2次，即得到靶蛋白-磁珠复合物。
  
• 目标蛋白与靶蛋白-磁珠复合物的结合：
  将含有目标蛋白样品加入到处理好的靶蛋白-磁珠复合物中，颠倒混匀。将离心管置于混合仪上，室温孵育30min。
  
• 磁珠洗杂：
  将离心管置于磁分离器大约1min，待溶液变澄清后，用移液器移出上清液，保留，以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的洗杂液，使用枪头反复吹打5～10次，将离心管置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液。重复上述步骤2次。目标蛋白通过与靶蛋白的结合，从混合体系中被捕获。
  
• 目的蛋白的洗脱：
  在上述离心管中加入与悬浮液等体积的洗脱液，用移液器吹打5次，然后在室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转离心管，5～10min后，置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸取上清液，收集洗脱组分，即得到靶蛋白和目标蛋白复合物。也可以再重复操作一次，分别收集洗脱组分，留待检测。